Роуз Бирн родилась в Сиднее. Она начала карьеру, снявшись в главных ролях в нескольких австралийских телефильмах, параллельно оттачивая мастерство в Молодежном театре Австралии. Выступила на сцене в престижной Театральной компании Сиднея в спектаклях La Dispute и «Три сестры». В 1999 Роуз прославилась в Австралии, сыграв роль Алекс в криминальной комедии Грегора Джордана «Two Hands». В ней тогда же снимался главной роли относительно неизвестный Хит Леджер. Фильм стал хитом и получил признание публики и критиков. В следующем фильме Бирн сыграла свою первую главную роль. Это был сюрреалистичный фильм Клары Ло «The Goddess of 1967». Бирн получила награду Copa Volpi за лучшую женскую роль на Международном Кинофестивале в Венеции в 1999 году.
